药材及成方制剂显微鉴别法

  

标题药材及成方制剂显微鉴别法
附录序号附录Ⅱ
内容全文  C. 药材及成方制剂显微鉴别法

  显微鉴别系指用显微镜对药材的切片、粉末、解离组织或表面制片及成方制剂中药味的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择有代表性的样品,根据各该药材鉴别项的规定制片。成方制剂根据不同剂型适当处理后制片。

  一、横切片或纵切片:选取药材适当部位,软化后用徒手或滑走切片法,切成10~20μm的薄片,选用甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其它试液处理后观察。必要时可包埋后切片。

  二、粉末制片:取粉末少量,置载玻片上,摊平,选用甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其它适当试液处理后观察。

  三、表面制片:将样品湿润软化后,切取一部分或撕取其表皮,加适宜的试液观察。

  四、解离组织片:如样品中薄壁组织占大部分,木化组织少或分散存在,可用氢氧化钾法;如果品坚硬,木化组织较多或集成较大群束,可用硝铬酸法或氯酸钾法。在解离前,应先将样品切成宽或厚约2mm的小条或片。

  1.氢氧化钾法

  置样品于试管中,加5%氢氧化钾溶液适量,加热至用玻璃棒挤压能离散为止,倾去碱液,加水洗涤后,取出少量置载玻片上,用解剖针撕开,以稀甘油装置观察。

  2.硝铬酸法

  置样品于试管中,加硝铬酸试液适量,放置,至用玻璃棒挤压能离散为止,倾去酸液,加水洗涤后,照1.法操作装置。

  3.氯酸钾法

  置样品于试管中,加硝酸溶液(1→2)及氯酸钾少量,缓缓加热,待产生的气泡渐少时,再及时加入氯酸钾少量,以维持气泡稳定地发生,至用玻璃棒挤压能离散为止,倾去酸液,加水洗涤后,照1.法操作装置。

  五、花粉粒与孢子制片:取花粉、花药(或小的花朵)或孢子囊群(干燥样品浸于冰醋酸中软化),用玻璃棒捣碎,过滤于离心管中,离心,取沉淀加新鲜配制的醋酐与硫酸(9∶1)的混合液1~3ml,置水浴上加热2~3分钟,离心,取沉淀,用水洗涤2次,加50%甘油与1%苯酚3~4滴,用品红甘油胶封藏观察。也可用水合氯醛试液装置观察。

  六、细胞及细胞内含物等的测量:在显微镜下测量细胞及细胞内含物等的大小,可用目镜测微尺测量。先将目镜测微尺装入目镜内,用镜台测微尺标化。标化时,转动目镜,移动镜台测微尺,使两种量尺的刻度平行,左边的“0” 刻度重合,再找第二条重合刻度。根据两条重合刻度间两种量尺的小格数,计算出目镜测微尺每小格在该物镜条件下所相当的大小(μm)。测量时,以目镜测微尺测量目的物的小格数,乘以每一小格的大小(μm)。通常是在高倍物镜下进行,但欲测量较长的如纤维、非腺毛等的长度时,则以在低倍物镜下测量较为方便。记录最大值与最小值(μm),可允许有少量略高或略低于药典规定的数值。

  七、细胞壁性质的检定:

  1.木质化细胞壁

  加间苯三酚试液1~2滴,稍放置,加盐酸1滴,因木化程度不同,显红色或紫红色。

  2.木栓化或角质化细胞壁

  加苏丹Ⅲ试液,稍放置或微热,显橘红色至红色。

  3.纤维素细胞壁

  加氯化锌碘试液;或先加碘试液湿润后,稍放置,再加硫酸溶液(33→50);显蓝色或紫色。

  4.硅质化细胞壁

  加硫酸无变化。

  八、细胞内含物性质的检定:

  1.淀粉粒

  (1)加碘试液,显蓝色或紫色。

  (2)用甘油醋酸试液装置,置偏光显微镜下观察,未糊化的淀粉粒显偏光现象;已糊化的无偏光现象。

  2.糊粉粒

  (1)加碘试液,显棕色或黄棕色。

  (2)加硝酸汞试液,显砖红色。材料中如含有多量脂肪油,宜先用乙醚或石油醚脱脂后进行试验。

  3.脂肪油、挥发油或树脂(1)加苏丹Ⅲ试液,显橘红色、红色或紫红色。

  (2)加90%乙醇,脂肪油不溶解(篦麻油及巴豆油例外),挥发油则溶解。

  4.菊糖

  加10%α-萘酚乙醇溶液,再加硫酸,显紫红色并很快溶解。

  5.粘液

  加钌红试液,显红色。

  6.草酸钙结晶(1)加稀醋酸不溶解,加稀盐酸溶解而无气泡发生。

  (2)加硫酸溶液(1→2),逐渐溶解,片刻后析出针状硫酸钙结晶。

  7.碳酸钙(钟乳体)

  加稀盐酸溶解,同时有气泡发生。

  8.硅质

  加硫酸不溶解。

  九、鉴别由粉末药材制成的成方制剂时,散剂照上述粉末制片法制片;丸剂、片剂等,可取2~3丸(片)研细后,取少量样品,滴加规定的试液,搅拌均匀,使粘结的细胞、组织散离,再按粉末特征进行鉴别;蜜丸可直接挑取少量样品制片,或酌用热水脱蜜后制片观察。

  附:显微试液配制法

  三氯化铁试液

  取三氯化铁1g,加水使溶解成100ml,即得。

  水合氯醛试液(见附录ⅩⅤ B)。

  甘油醋酸试液

  取甘油、醋酸及水各等份,混匀,即得。

  苏丹Ⅲ试液

  (见附录ⅩⅤ B)。

  钌红试液

  取10%醋酸钠溶液1~2ml,加钌红适量使呈酒红色,即得。

  本液应临用新制。

  间苯三酚试液

  取间苯三酚1g,加90%乙醇100ml使溶解,滤过,即得。

  本液应置棕色玻璃瓶内,在暗处保存。

  组织解离液

  (1)取硝酸10ml,加入100ml水中,混匀。 (2) 取铬酸10g,加水100ml使溶解。用时将二液等量混合,即得。

  品红甘油胶

  取动物胶1g,加水6ml,浸泡至溶化,再加甘油7ml,加热并轻轻搅拌至完全混匀,用纱布滤于培养皿内,加碱性品红溶液(碱性品红0.1g,加无水乙醇600ml及樟油80ml,溶解)适量,混匀,凝固后即得。

  α-萘酚试液

  取15%的α-萘酚乙醇溶液10.5ml,缓缓加硫酸6.5ml,混匀后再加乙醇40.5ml及水4ml,混匀,即得。

  铜氨试液

  取碳酸铜0.5g,加水适量,置乳体中研磨,再加浓氨溶液10ml使溶解,即得。

  硝酸汞试液

  取汞4.5g ,加发烟硝酸3ml,俟作用完毕,加等量水稀释,即得。

  本液应置棕色玻璃塞瓶内,在暗处保存。

  氯化锌碘试液

  取碘化钾8g,加水8.5ml使溶解,再加无水氯化锌2.5g使溶解,加碘适量至饱和,即得。

  本液应置棕色玻璃塞瓶内保存。