ELISA法检测幽门螺杆菌抗体的临床意义

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本研究用间接ELISA法检例患者和健康输血员血清中抗HpIgA、IgG同时还检测了胃粘膜中的Hp,以探讨Hp抗体测定的临床意义。

1 材料和方法

1.1 材料

本组217例患者经胃镜及胃粘膜组织学诊断为十二指肠球部溃疡(DU)48例,胃溃疡(GU)27例,慢性萎缩性胃炎(CAG)18例,慢性清表性胃炎(CSG)96例,复合性溃疡(CU)7例,胃癌(GCa)14例,胃粘膜正常2例。慢性胃炎中活动性胃炎(ACG)54例,非活动性(NACG)60例。所有患者均抽取空腹静脉血,此外还收集了80例健康输血员血清测抗HpIgA、IgG。

1.2 方法

①胃粘膜内Hp菌检测活检粘膜直接涂片检查及Hp的分离培养鉴定均参照张振华所报道的方法。②ELISA方法:从患者胃粘膜中培养出的7株Hp菌分离纯化,超声粉碎后在4℃下1500g离心30min,取上清蛋白定量后作抗原。用50mg/ml的抗原包被聚苯乙稀反应板,用间接ELISA法测定,每板均设标准阳性和阴性对照,将两者OD值用作为质控,每板此值之差在±0.5范围内。结果用特测标本OD值与标准阳性OD值之比来表示,该比值在血清IgA≥0.6,在IgG≥0.5为阳性,在胃液IgA≥0.145为阳性。③吸收抑制试验:用7例在ELISA试验中高效价IgA、IgG的Hp感染者的血清混合后从1:10开始对倍稀释至1:160,然后分别用Hp、空肠弯曲菌(CJ)及大肠杆菌完整的细菌和Hp抗原吸收后,按上述方法做ELISA。

计数资料用卡方检验,计量资料用t检验。

2 结果

Hp阳性患者血清中抗HpIgA、IgG含量均显著高于Hp阴性者(P<0.01)。与细菌学比较其敏感性分别为92.1%和95.7%,特异性分别为91.1%和88.5%,符合率分别为71.7%和93.2%(表1)。可以看出不同疾病之间的血清抗HpIgA和LgG含量有显著差异(P<0.01),两组比较发现血清IgA含量在ACG组显著高于除CU外的其它各组(P<0.05,P<0.01),消化性溃疡各组显著高于NACG组(P<0.01),2例组织学正常者IgA、IgG分别为0.44和0.37,80例健康输血员血清抗HpIgA,IgG的含量和阳性率均显著低于ACG,GU,DU及GCa组(P<0.01,P<0.05)。研究表明,血清Hp抗体与胃炎的严重程度有关,中重度胃炎血清抗HpIgA,IgG的阳性率为82.4%和79.0%,显著高于轻度胃炎的45.6%59.7%(P<0.01,P<0.05)。但Hp抗体含量和阳性率在浅表性胃炎和萎缩性胃炎之间无显著差异(P<0.05表2)。

表1 胃粘膜内Hp和血清Hp抗体的比较

胃粘膜HpnIgAIgG
X±S阳性数(%)X±S阳性数(%)
阳性1390.79(0.19)128(92.1)0.65(0.13)133(95.7)
阴性780.50(0.1)7(9.0)0.45(0.13)9(11.5)

表2 各种胃部疾病血清抗HpgA,IgG比较

病 种nIgAIgG
X±S阳性数(%)X±S阳性数(%)
ACG540.82(0.2)49(90.7)0.69(0.1)51(94.4)
NGCG600.53(0.2)22(36.7)0.47(0.1)23(38.3)
GU270.71(0.2)19(70.7)0.59(0.2)20(74.1)
DU480.71(0.2)31(64.6)0.57(0.2)34(70.8)
CU70.86(0.4)5(71.2)0.58(0.1)5(71.2)
GCa140.68(0.2)8(57.1)0.55(0.1)8(57.1)
RG50.54(0.1)120.00.52(0.2)1(20.0)
输血员800.47(0.2)27(33.8)0.43(0.2)25(31.3)

Hp阳性患者胃液中抗HpIgA显著高于Hp阴性者(P<0.01),与细菌学结果比较敏感性,特异性与符合率分别为96.4%92.9%和95.3%(表3)。

表3 胃粘膜内Hp的检出率和胃液抗HpIgA的比较

胃粘膜nX±S阳性数
阳性570.438(0.234)55(96.5)
阴性280.101(0.045)2(7.1)

不同疾病之间胃液抗HpIgA含量有显著差异(表4,P<0.01),两组比较发现ACG组、消化性溃疡各组和CGa组显著高于NACG组(P<0.05)。此外中重度胃炎胃液抗HpIgA的阳性率为76.6%,显著高于累度胃炎的40.0%(P<0.05)。

表4 各种胃部疾病胃液抗HpIgA结果

病种nX±S阳性数(%)
ACG240.497(0.252)22(91.7)
NACG210.162(0.161)7(33.3)
GU150.281(0.212)10(66.7)
DU150.269(0.208)12(80.0)
CU30.567(0.298)2(66.7)
GCa50.502(0.159)4(80.0)

无论是完整的Hp菌还是超声粉碎提取的Hp抗原与Hp阳性血清共同温育后都能使血清中抗HpIgA和IgG效价明显下降,而用大肠杆菌和Cj吸收后的血清抗体仅有少许下降,此结果证明本试验具有特异性。

3 讨论

本研究发现Hp阳性者血清抗HpIgA,IgG的阳性率显著高于Hp阴性者。与细菌学检查比较其敏感性、特异性和符合率高达95%~88%,与国外文献报道相似。吸收抑制试验证实本研究所用ELISA法测得的血清Hp抗体可定为特异的针对Hp的免疫反应。因此,ELISA阳性结果强有力支持Hp感染。本研究表明,血清中抗HpIgA、IgG密切反映了消化性溃疡的存在和胃炎的组织学变化。血清Hp抗体在ACG组的阳性率达90%以上,在消化性溃疡为67%和71%,而在NACG中为36%和38%。健康输血员血清中抗Hp抗体显著低于消化性溃疡和慢性胃炎。此外,中重度胃炎血清中Hp抗体的含量和阳性率显著高于轻度胃炎。上述结果表明Hp的血清检测可用来诊断Hp感染和用作筛选胃镜检查患者,这将有助于那些不宜做胃镜检查患者的诊断,并可用于Hp感染的流行病学调查及评价和追踪抗Hp治疗效果。

Hp寄居不但可引起宿主的全身免疫反应,而且引起胃肠道的局部免疫反应。本研究显示,Hp阳性者胃液中抗HpIgA显著高于Hp阴性者,与细菌学比较其敏感性、特异性和符合率高达96%至92%,高于国外文献报道。本研究结果还表明,胃液中抗HpIgA与消化性溃疡及胃炎的存在和组织变化密切相关。ACG组及消化性溃疡各组阳性率显著高于NACG组,中重度胃炎显著高于轻度胃炎。局部分泌性IgA的确切作用尚不清楚。本研究胃液内抗HpIgA检测的敏感性、特异性均高于血清学试验,这说明局部免疫反应与Hp感染的关系比全身免疫反应更为密切,故检测胃液内抗HpIgA可作为血清学试验的补充,两者结合可进一步提高Hp感染的免疫学诊断准确性。

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