酸奶饮料中低聚木糖的测定

  原理:酸奶饮料中蔗糖、乳糖及添加剂干扰低聚木糖组分的分离,为了更准确地测定酸奶中低聚木糖的含量,将酸奶饮料用氢氧化铜沉降蛋白、脂肪,再用60%乙醇水溶液沉降去除大分子多糖及高聚合度低聚糖,而后进行硫酸水解,低聚木糖组分水解变为木糖。酸奶饮料中低聚木糖含量(%,以木糖计)即为酸奶饮料中水解前后木糖含量的差值。

  步骤:1.试剂:

  ●4mol/L硫酸:98%硫酸用水稀释而成,需标定较准确浓度;

  ●45%氢氧化钠:取22.5g氢氧化钠,加入50ml水溶解即可;

  ●4%氢氧化钠:取8.0g氢氧化钠,加入200ml水溶解即可;

  ●7%硫酸铜:取35.0g硫酸铜结晶,加入500ml水溶解即可。无水乙醇(AR)、乙腈(色谱级)。

  2.仪器及色谱条件:

  ●仪器:高压液相系统:515高压泵、U6K进样阀、柱温箱、2414示差折光检测器、色谱工作站,真空泵或电吹风。

  ●色谱条件:色谱柱:键合氨基柱(nova-pak250×3.9mmidsteel,4μm);

  流动相:乙腈∶水(75∶25v/v);流速:1.0ml/min;柱温:35℃;示差检测器温度:35℃。3.样品预处理:

  ●取10.0ml酸奶饮料,加入水20ml,摇匀,加入7%硫酸铜,4%氢氧化钠4.0ml,加水定容100ml,摇匀;

  ●滤纸过滤,取滤液50.0ml,浓缩至10.0ml,加入无水乙醇12.0ml,沉降聚合度高的低聚糖;

  ●用0.45μm膜过滤,用电吹风(大于50℃)吹赶尽乙醇,用水溶解定容至10.0ml(该溶液为样品水解前上机测定溶液M1);

  ●取9.0ml于水解管中,加入4mol/mlH2SO41.62ml,摇匀,于100℃水解1小时,冷却;

  ●用45%NaOH中和(pH值5~6),加入少量活性炭粉脱色,冷却;

  ●滤纸过滤,取清液3.0ml,加入12.0ml无水乙醇,摇匀;

  ●当有Na2SO4析出时,用0.45μm水相膜过滤,取滤液10.0ml,电吹风吹干;

  ●加水溶解,定容1.0ml,用0.45μm水相膜过滤(该溶液为样品水解后上机测定溶液M2),上机测定。4.总稀释体积:V(ml)=100×10/50×(9.0+1.62+1.44)/9.0×(3.0+12.0)/3.0/10.0×1.00=13.4ml。

  5.计算:以木糖为标样,外标单点校正。

  Mi(g/100ml,以木糖计)=Aspl/Astd×Cstd×V×10-3/W×100低聚木糖含量X(%,以木糖计)=M2-M1M2:酸奶饮料水解后低聚木糖含量(%);M1:酸奶饮料水解前低聚木糖含量(%);

  Aspl:样品中木糖组分峰面积;

  Astd:标样木糖组分峰面积;

  Cstd:标样木糖组分浓度(mg/ml);V:总稀释体积(ml);W:样品重量(ml)。