附录 干扰素效价测定

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采用CPE(细胞致病效应)抑制为基础的抑制微量测定法,以每ml干扰素检品的最高稀释度仍能保护半数细胞(50)免受病毒攻击的稀释度的倒数定为干扰素单位。以国际单位(IU)表示,并用国家标准品校正结果。

1 细胞培养

将新鲜传代24~48小时的Wish细胞(人羊膜细胞)以约35万/ml的浓度另入96孔组织培养板上,每孔100μl,置37℃5%CO2孵箱中培养4~6小时。

2 样品稀释与细胞混合

干扰素检品做4倍系列稀释,每份检品做6个稀释度(如100万单位,则测4-12~4-7)每个稀释度加2孔,与培养板中的细胞等量混合,置37℃5%CO25%CO2孵箱培养18~24小时。

3 加病毒

倒掉培养板中的上清液,以100CCID50/ml的浓度加入VSV(水泡性口腔炎病毒),每孔100μl,37℃5%CO2孵箱培养24小时左右。

4 观察结果

显微镜下观察细胞病变,若病毒对照各孔细胞出现75%~1000%的明显病变和死亡(变圆、死亡、脱落(,而细胞对照组中的细胞仍生长良好(病变=0),则表明对照系统合格,结果成立。

5 计算

通常可按Reed?/FONT>Muench法计算,其步骤如下:

(1)计算保护百分比

稀释度病变平均值(每孔)正常平均值(每孔)累积数比例百分比(%)
病变正常正常/病变+正常
4-10401313/13100
4-203099/9100
4-312155/683
4-422322/540
4-54070
4-640110

(2)求出干扰素单位

距离比=(·高于50%的百分数-50)/(高于50%的百分数-低分50%百分数)=(83-50)/(83-40)=33/43=0.77

即此批干扰素稀释到4-3。77(1∶186)时能保护半数细胞免受攻击病毒损害。此批干扰素效价为186单位,经国家标准品修正,得出干扰素的国际单位(以IU表示)。

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