活血化瘀药实验

  活血化瘀药实验目的了解活血化瘀药研究中常用的方法,这些方法的基本理论和意义,为进一步研究活血化瘀药打下一定的基础。

  活血化瘀药实验

  目的:

  了解活血化瘀药研究中常用的方法,这些方法的基本理论和意义,为进一步研究活血化瘀药打下一定的基础。

  要求:

  ①了解血瘀同血液流变学、血流动力学和微循环障碍的关系。

  ②熟悉当前活血化瘀药研究的概况。

  ③熟悉研究活血化瘀药的常用方法,并掌握其中一、二种常用指标。

  项目:

  活血化瘀药的作用常与改善血瘀患者血液流变学、血流动力学和微循环有关。以下着重就这三方面介绍研究活血化瘀药常用的方法和指标。部分活血化瘀药的功效还同增强子宫活动、改善免疫功能或其镇痛作用有关,但迄今还不能证明这些是多数活血化瘀药所共有的特性,有关方法此处不予介绍。

  (1)影响血液流变学特性的一些客观指标:

  ①血液和血浆粘度。血瘀患者的血浆和全血粘度常较正常值为高。液体的粘度取决于其内部对于流动起着阻抗作用的内摩擦力的大小,内摩擦力大则粘度大,反之则小。水具有较低的粘度,故具有较高的流度;相反,油具有较高的粘度,故具有较低的流度。所以液体的粘度是测度液体流变性的重要指标。

  测定液体粘度最简单的方法是测定液体流过水平圆管时通过某一截面积的液体体积,即流量。粘度的测定多采用两种液体,即将测试液体和对照液体比较的方法。在血液粘度的测定上,对照液体多采用净水或生理盐水。由于两种液体通过同一圆管(毛细管)时,如果两端的压力差相同,则单位时间内流出的液量同流过相同体积所需的时间成反比,所以也可以该时间t作为液体粘度的量度。例如健康人的血液粘度多在4.0左右,即流过同样体积的血液所需的时间较水大4.0倍左右。

  健康人的血液粘度与性别有关,男性一般高于女性。据237例健康人测定结果,男性4.25土0.41,女性为3.65土0.32。血浆粘度则男女相似,均在1.65左右。全血粘度的性别差异主要是与男女血细胞数量不同有关。

  ②血细胞压积。血细胞压积反映血液内血细胞成分的多少。血细胞压积是影响血液粘度的重要因素,也是反映血液流变学特性的重要指标。

  ③血沉和红细胞电泳时间。血液的粘度,除受血细胞数量的影响外,还受血细胞(主要是红细胞)的分散状态的影响。红细胞愈分散则粘度愈小。相反,如处于聚集状态则粘度较高。红细胞的分散程度又直接取决于红细胞表面所带负电荷的多少,所带负电荷愈多,则红细胞间的静电排斥力愈强,红细胞之间也就愈不易发生聚集。血沉和红细胞电泳时间都是从不同的侧面反映红细胞的分散度。血细胞表面带电密度愈小,则愈易聚集,故沉降愈快。同样,如该红细胞处于一定的直流电场中,则带电密度愈高,在电场中移动愈快,故红细胞电泳时间成为测定红细胞表面所带负电荷密度多寡的一个重要指标。在具体测量中,红细胞电泳时间与电场强度和电极间距离等条件有关,条件不同,测得的数据也不同,故对照样品与测试样品必须控制在相同条件下进行,才能得到正确的结果。

  ④血小板聚集性和血小板血栓形成实验。血小板聚集性是研究活血化瘀药的一个重要指标。常用体外比浊法。血小板混悬液的浊度同所含分散状态的血小板数密切相关。血小板聚集数愈多,分散状态的血小板数愈少,混悬液浊度愈低。所以可以用浊度变化来表示血小板的聚集性能。混悬液一般用多血小板血浆。常以二磷酸腺苷(ADP)或胶原作为血小板聚集剂。比浊管如为玻璃管,必须先硅化,即以1%硅油甲苯溶液湿润后烤干备用。比较加等量药液和对照液(如生理盐水)后不同时间的光密度变化。

  血小板血栓形成实验动脉血流中的血小板易粘附于粗糙物表面。如将动物右颈总动脉近心端和左颈外静脉近心端以聚乙烯管接通形成旁路,聚乙烯管中段放入一根6cm长的丝线,当打开血流后,血液从右颈总动脉经聚乙烯管返回左颈外静脉,15分钟后中断血流,迅速取出丝线秤重,用体重相等的两个动物配对比较给药与不给药血栓重量,进行显著性测验。实验动物必须肝素化。

  (2)与血瘀有关的心血管功能指标:

  ①器官血流量的测定。许多活血化瘀药能扩张外周血管,增加有关器官的血沛量。如增加冠心病患者的心肌血流量,增加闭塞性脉管炎血瘀患者的肢体血流量等,故测定器官血流量是用以测定一个方药的活血化瘀功效的常用指标。测定的方法很多,可以是非创伤性的,也可以是创伤性的,也可以用营养液灌流离休器官,以间接判定药物对器官血流量的影响。

  非创伤性的方法不仅在动物实验可用,也可在临床使用,如用同位素的方法或阻抗血流图的方法进行测定。

  在动物实验中常采用创伤性方法。如采用电磁血流量计或气泡流量计方法测定器官血流量。电磁流量计法能较正确地反映体内各器官的血流量,因而在临床和动物实验中应用较广。其主要优点是测量时不必切断血管,只需选择适当大小的探头嵌套在血管外表面,即能在流量计上显示血流速度的读数,也可接记录仪描记。其基本原理是血液成分作为运动的导体通过探头磁场时可诱导产生电动势,后者当磁场强度和血管直径不变时,同血流速度成正比。气泡流量计法的基本原理是将血流引入体外玻璃管,注入气泡,气泡在已知容积的玻璃管内随血流运行,从气泡运行速度计算血流速度。

  在动物实验中,还可采用离体器官灌流以了解药物对于血管的作用,从而间接判定对器官流量的影响。如Langendorff离体哺乳类心脏灌流法。配制好适当的心肌营养液,在恒定的压力下,通过恒温装置后,使营养液经冠脉灌流整个心脏。具有冠脉扩张作用的药物可使灌流量增加。

  ②抗心肌缺血缺氧试验。

  垂体后叶素法脑垂体后叶素可使包括冠脉在内的全身血管收缩,造成急性心肌供血不足,在心电图上可有特异的缺血变化,如ST-T波变化等,比较给药组与对照组阴性率差异,判定药物是否具有抗心肌缺血作用。

  异丙肾上腺素法异丙肾上腺素可增强心肌收缩力,加速心率,增加心肌耗氧量,连续使用可形成实验性心肌梗塞,用心电图和病理切片方法均可检测,比较给药组与对照组病变程度的差异,判定药物作用。

  冠脉结扎法结扎动物冠脉的一个分支,如冠状动脉前降支,造成实验性心肌梗塞。根据心电图ST段和Q波标测或硝基四氮唑蓝大体标本染色,判定病变程度及范围大小。比较给药组与对照组的差异,判定药效。常用动物为家兔或狗。

  (3)对微循环影响的实验:

  甲皱、球结膜、舌、唇、齿龈等是目前作微循环观察时常用的部位。其中人体最常用的是甲皱。兔常采用眼球结膜,或用金黄色地鼠夹裹。

  观察微循环常用的指标包括微血管形态、密度,微血流的流态、流速,以及微血管周围有无渗出、出血。如正常人甲皱微血管呈襻状(发夹形),微血流呈线状快速流动,微血管周围无渗出和出血。微循环障碍时,畸形微血管襻的比例增加、微血管痉挛、血流缓慢、流态异常(虚线状、颗粒状或絮状)、微血管周围有渗出、出血。皮肤温度的高低对于微循环的影响很大,尤以流速、流态对温度变化最为敏感,温度升高,流速加快,聚集的血细胞可发生解聚。所以如用作动态对比,前后皮肤温差不能超过30C。微循环可通过微循环显微镜观察。