“敌鼠”中毒的检查诊断

　　“敌鼠”(diphacinone)是一种常见的抗凝血杀鼠剂，属于茚二酮类杀鼠药，其化学名为2-(2，2二苯基)乙酰基-1，3茚满二酮，常使用其钠盐，称为敌鼠钠盐。“敌鼠”为无嗅黄色针状结晶，其钠盐为黄色粉末。“敌鼠”或其钠盐均为高毒品，对小鼠经口ld50为112～196mg/kg，钠盐ld50为6112～100.7mg/kg;成人口服0106～0.25g敌鼠钠盐可引起，015～2.5g可致死。

　　该类药主要的毒理作用是拮抗体内维生素k1的活性，阻碍凝血酶的合成，损害微血管，降低血液凝固能力，从而造成皮下出血和内脏大量出血而引起死亡。该类药以1/万的含量配成毒饵，用于卫生灭鼠工作。此类杀鼠剂的中毒潜伏期较长，发病缓慢，一般口服后3～4d，长者19d，平均10d才出现中毒症状，死亡高峰为4～6d。因误服、使用不当或有意投毒造成人和牲蓄中毒死亡的事件时有发生。笔者对血和尿中的敌鼠钠盐采用不同的提取净化方法，然后用化学分析法和薄层色谱法进行分析，结果报告如下。

　　1材料与方法

　　1.1材料与试剂硅胶gf254薄层板(10cm×5cm)，青岛海洋化工厂生产；紫外灯(波长254nm和366nm)；无水乙醇，乙酸乙酯，氯仿，甲醇，丙酮，四氯化碳，石油醚，苯，无水硫酸钠，中性氧化铝，均为分析纯。10%盐酸，0101mol/lnaoh，1%三氯化铁乙醇溶液；敌鼠钠盐(含敌鼠钠80%)由中心消毒科提供，配成2mg/ml的丙酮溶液。

　　1.2样品的处理

　　1.2.1血样的处理取510ml血，加10%盐酸数滴调ph值为3，用乙酸乙酯提取3×20ml次，合并提取液过自制的10ml正己烷淋洗过的净化小柱(三极中性三氧化铝：无水硫酸钠=0.2∶015)，收集滤液于60℃水浴挥干，得检样(血)。

　　1.2.2尿样的处理取15ml尿，加10%盐酸数滴调ph值为3，用乙酸乙酯提取3×30ml次，合并提取液用0101mol/lnaoh调ph至9，弃有机相，再用乙酸乙酯提取水相3×20ml，合并乙酸乙酯提取液过正己烷淋洗过的净化小柱(三极中性三氧化铝∶无水硫酸钠=0.2∶0.5)，收集滤液于60℃水浴挥干，得检样(尿)。

　　1.2.3对照品的处理各取2g敌鼠钠盐，分别按血和尿的处理方法提取净化后，挥干得对照品(1)和(2)。并把直接用丙酮溶解的2mg/ml敌鼠钠盐作为对照品(3)。

　　1.3“敌鼠”的检验

　　1.3.1化学分析法—三氯化铁显示反应分别取用1ml丙酮溶解的检样(尿)、检样(血)、对照品(1)和(2)以及2mg/ml的对

　　照品(3)溶液1滴滴于滤纸上，加1%的三氯化铁醇溶液1滴。

　　1.3.2薄层分析法把上述检样和对照品分别点样于硅胶gf254薄层板上，在3组不同的展开剂中展开。经展开凉干后，①在254nm波长的紫外光照射下观结果；②在366nm波长的紫外光照射下观察结果；③上述薄层板喷雾1%三氯化铁乙醇溶液后再观察结果。展开剂：①三氯甲烷∶乙酸乙酯∶乙酸=4∶2∶1②四氯化碳∶甲醇=2∶1③石油醚∶苯=10∶1

　　2结果

　　三氯化铁显色反应对照品及样品与三氯化铁的反应均呈砖红色。

　　3讨论

　　3.1提取净化条件的选择

　　3.1.1血样的净化由于血样少，检材有限，所以在提取净化过程中中性al2o3和无水na2so4的量一定要适度。用量大了，“敌鼠”的提取率低。可能无法检验；用量小了，净化效果不好，最终影响实验结果。实验表明：采用中性al2o3∶无水na2so4=0.2∶015，正好使510ml血样得到很好净化。

　　3.1.2尿样的处理尿样成分较复杂，实验比较了直接用自制小柱净化与用反提后再过小柱，发现用10%盐酸调ph3提取后再用的0101mol/lnaoh调ph9反提，净化效果更好，杂质对检验结果的干扰小。

　　3.1.3展开剂的选择通过对3组不同展开剂的rf值及显色结果的比较，发现虽然一些文献常推荐石油醚∶苯(10∶1)作为敌鼠钠盐薄层色谱检验的展开剂，但对于生物检材，这组展开剂分离效果并不好。在实验用的3组展开剂中，四氯化碳∶甲醇(2∶1)的展开效果最好。

　　3.2检测方法的比较三氯化铁显色反应和薄层法的检测结果一致。三氯化铁显色反应分析速度快，简便易行，可以作为一种筛选方法使用，要作进一步确认可用薄层法。

　　3.3本实验的关键是检材的提取净化如果净化不好，不能得到明显的显色结果。检材通过自制小柱净化后，得到斑点清晰、分离出好的图谱。