第二节 标本采集法

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一、血液标本采集法

1.血清标本 测定血液中某些物质的含量(如非蛋白氮,尿素氮等)。

2.血清标本 测定血清酶、脂类、电解质和肝功能等。

3.血培养标本 查找血液中的病原体(如伤寒杆菌培养等)。

一般常规检验用毛细血管采血法,这种采血法由检验人员执行,血清生化及细菌培养等检验因需要较多量的血液,一般由护理人员协助采血。目前不少生化项目检验已采用微量测定法,故也可采用毛细血管采血法采标本。

(二)静脉采血法

1.用物 同静脉注射法,备干燥注射器(5-10ml),7号针头,标本容器(按需要备干燥试管、抗凝管或血培养瓶),酒精灯,火柴等。

2.操作方法

(1)备齐用物,贴好标签,核对无误后按静脉穿刺法采取所需血量,立即卸下针头,将血液沿管壁缓慢注入试管内,切勿将泡沫注入,避免震荡,以防红细胞破裂而造成溶血。因血液中细胞的内外成分有很大差异,如细胞内钾离子浓度是细胞外的20倍,细胞内的某些酶含量也较细胞外高,如发生溶血,则直接影响检验结果的准确性。

(2)如需全血、血浆,可将血液如上法注入盛有抗凝剂的试管内,立即轻轻摇动,使血液和抗凝剂混匀,以防血液凝固。如需作二氧化碳结合力测定时,抽取血液后,应立即注入有石蜡油的抗凝试管中,注入时针头应插入石蜡油面以下,以隔绝空气,立即送验。否则血液中二氧化碳逸出,使检验结果降低,影响准确性。

(3)采集血培养标本时,应防止污染。静脉采血后,将血液注入培养瓶内,一般培养标本用肉汤培养瓶,如做伤寒杆菌培养则备胆汁培养瓶。

临床常用的培养瓶有两种,一种是密封瓶,瓶口除橡胶塞外另加铝盖密封。瓶内盛培养液约50ml,经高压灭菌,使用时将铝盖剔去,用2%碘酒和70%酒精消毒瓶盖,更换针头将抽出的血液注入瓶内,摇匀后送验。另一种是三角烧瓶,瓶口以棉花塞子及纸严密包封,使用时先将封瓶纸松开,取血后将棉塞取出迅速在酒精灯火焰上消毒瓶口,将血液注入瓶内,轻轻摇匀,再将棉塞经火焰消毒后盖好,扎紧封瓶纸送验。一般血培养取血5ml,亚急性细菌性心内膜炎病人,因血中细菌数目较少,为提高细菌培养阳性率,应取血10-15ml.

(4)采血完毕,连同检验单及时送验,清理用物,归还原处。一次性注射器使用后应经消毒液浸泡集中处理。

血液标本采集所需血量视检验目的而定,各医院检验方法不同,其采血量也各异。下面介绍常用检验项目全血、血清标本和放射免疫检验采血量与要求(表17-1,17-2,17-3,17-4)。

表17-1常用全血标本采血量与要求(不需空腹)

检验项目采血量(ml)标本容器要求
血氨(BA)5.0肝素抗凝立即送验
血液酸碱度(pH)2.0肝素抗凝空针肝素化后方可采血
二氧化碳分压(PaO22.0肝素抗凝隔绝空气
氧分压(PaO22.0肝素抗凝隔绝空气
碳酸氢盐2.0肝素抗凝隔绝空气

表17-2 常用全血标本采血量与要求(空腹)

检验项目采血量(ml)标本容器要求
血沉ESR1.63.8% 枸橼酸钠溶液0.4ml充分混匀及时送验
血糖BG1~2抗凝瓶充分混匀及时送验
二氧化碳结合力(CO2-Cp)2.0抗凝瓶充分混匀及时送验
非蛋白氮(NPN)2.0抗凝瓶充分混匀及时送验
尿素氮(BuN)2.0抗凝瓶充分混匀及时送验
红细胞比积(Hct)2.0抗凝瓶充分混匀及时送验
肌肝(Cr)3.0抗凝瓶充分混匀及时送验
肌酸(Cre)   
凝血酶元活动度及时间(PT)1.8试管内盛3.13%枸橼酸钠0.2ml充分混匀及时送验
纤维蛋白元(Fb)2.0抗凝瓶充分混匀及时送验
E-玫瑰花结形成试验(ERT)2.0肝素抗凝 
HDL-胆固醇2.0不抗凝 

表17-3放射免疫检验采血量与要求

 检验项目采血量(ml)要求
甲状腺功能测定总三碘甲状腺原氨酸(TT3
总甲状腺素(TT4
促甲状腺激素(TSH)
甲状腺球蛋白抗体(TGA)
甲状腺微粒体抗体(MCA)
3、3、5、三碘甲状腺原氨酸γt3
4.0防止溶血
防止溶血
防止溶血
防止溶血
防止溶血
防止溶血
乙肝检测表面抗原(HBsAg)
表面抗体(HBsAb)
e 抗原(HBsAg)
e抗体(HBeAb)
核心抗原HBcAg
核心抗体HBcAb
4.0空腹采血防止溶血
      

表17-4常用血清标本采血量与要求

检验项目采血量ml多项目合并采血量标本容器要求
丙氨酸氨基转移酶(ALT)
门冬氨酸氨基转移酶(AST)
胎儿甲种球蛋白(AFP)
乙肝表面抗原(HBsAg)
1.0
1.0
1.0
1.0
4ml干燥试管
干燥试管
干燥试管
干燥试管
空腹抽血严防溶血
空腹抽血严防溶血
空腹抽血严防溶血
空腹抽血严防溶血
黄疸指数(Ⅱ)
总胆红素(TBIL)
2.0
2.0
3ml干燥试管
干燥试管
空腹抽血严防溶血
空腹抽血严防溶血
总胆固醇(Chol)
胆固醇脂(Choiesl)
三酸甘油酯(TC)
2.0
2.0
2.0
3ml干燥试管
干燥试管
干燥试管
空腹抽血严防溶血
空腹抽血严防溶血
空腹抽血严防溶血
血清蛋白(A/G)
蛋白电泳(SPE)
3.0
2.0
3ml干燥试管
干燥试管
严防溶血
严防溶血
碱性磷酸酶(AKP)
血清淀粉酶(AMS)
乳酸脱氢酶(LDH)
2.0
3.0
3.0
 干燥试管
干燥试管
干燥试管
严防溶血
严防溶血
严防溶血
血钾(K)
血纳(Na)
血钙(Ca)
血氯化物(Cl)
2.0
2.0
2.0
2.0
3ml干燥试管
干燥试管
干燥试管
干燥试管
严防溶血
严防溶血
严防灰尘污染
严防灰尘污染
γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)
肥达氏反应(Widal sreaction)
抗O(ASO)
红斑狼疮细胞(LES)
2.0
3.0
3.0
5.0
 干燥试管
干燥试管
干燥试管
干燥试管
空腹抽血严防溶血
严防灰尘污染
严防灰尘污染
写明时间及时送验
      

3.注意事项

(1)根据不同的检验目的,计算所需的采血量,选择试管。

(2)需空腹抽血时,应事先通知病人,避免因进食而影响检验结果(因清晨空腹时血液中的各种化学成分处于相对恒定状态)。

(3)采集血标本应严格执行无菌技术操作,严禁在输液、输血的针头或皮管内抽取血标本,应在对侧肢体采血。

(4)如同时抽取几个项目的血标本,一般应先注入血培养瓶,其次注入抗凝管,最后注入干燥试管,动作要准确迅速。

(5)取血后,应将注射器的活塞略向后抽,以免血液凝固而使注射器粘连并阻塞针头。

(三)动脉采血法(以作血气分析为例)

1.用物 同静脉穿刺法,另加肝素抗凝剂(表17-5),橡皮泥或橡皮塞。

2.部位 多选用桡动脉、肱动脉、股动脉。

3.操作方法 用2 ml注射器,连接7号针头,吸1:500肝素生理盐水溶液1ml,将活塞来回抽动,使内壁沾匀肝素,再推掉全部肝素溶液,将活塞推至空筒顶端后不再回拉,以保持注射器内无空气。选择动脉(桡动脉采血比较方便),常规消毒病人的皮肤及操作者的左手食、中指后,以左手绷紧皮肤,右手持注射器,用左手食指触摸动脉搏动处,以45度角进针,见血液自动加入空筒内至2ml后拔出针头,嘱病人按压局部5分钟,应立即用橡皮泥或橡皮塞封闭针头(针头斜面埋入橡皮中即可),以隔绝空气,在手中搓动注射器,使血与肝素混合,立即送验。

表17-5 常用血液抗凝剂

剂名抗凝力机理应用禁忌
10%草酸钾0.2ml抗凝10ml的血与Ca++结合成不溶性草酸钙而抗凝血非蛋白氮二氧化碳结合力血K
血Ca
草酸钠1 ~2mg抗凝1ml的血与Ca++结合成不溶性草酸钙而抗凝血凝血酶原时间及复钙时间测定血Na+
血Ca
3.8%枸橼酸钠6mg抗凝1ml的血与血中生成不溶性离子化的枸橼酸钙,阻止血液凝固血沉1:4
输血1:9
 
双草酸盐(草酸钾、草酸胺)0.5ml抗凝5ml的血保持红细胞形态不变RBC压积测定 
草酸钾
氟化钠
0.1ml抗凝1ml的血抑制葡萄糖分解而保持血糖浓度血糖测定BW N(尿素氮)
肝素0.1ml抗凝5~10ml的血抑制凝血酶元转为凝血酶血氨
血气分析
 

4.注意事项

(1)血标本必须隔绝空气。因为血气分析是指当天大气压条件下,用隔绝空气的血标本与一定浓度的气体相结合,而后测定人体内PH值、氧分压等,作为监测及追踪观察病人的血气情况。血标本中若进入空气将产生误差。因此采血的注射器使用前应检查有无漏气,针头必须连接紧密,标本采集后立即封闭针头斜面。

(2)及时送验。标本采集后应立即送验,如要等待测定,应将标本置于0到4度冰箱内保存不得超过1小时,以免影响检验结果。

二、尿标本采集法

(一)尿常规标本

1.目的 检查尿液的色泽、透明度、比重、尿量、尿蛋白尿糖定性、细胞和管型等。

2.用物 容量在100ml以上的清洁玻璃瓶1个。

3.操作方法

①备容器贴检验单副联,注明病区、床号、姓名等。

②当晚并待病人留取翌日晨第一次尿液约100ml于标本瓶内。由于晨尿浓度较高,且不受饮食的影响,检验结果更具参考意义。

③留取尿标本时,不可将粪便混于尿液中,以防粪便中的微生物使尿液变质。

昏迷或尿潴留病人可导尿留取标本,男病人也可用塑料袋固定接尿。女病人在月经期不宜留取尿标本。

(二)尿培养标本

1.目的 取未被污染的尿液作细菌培养及计数,以明确诊断。

2.用物 无菌试管、试管夹、酒精灯及火柴,必要时备外阴冲洗及导尿物一套(见导尿术)。

3.操作方法 女病人留中段尿法:

病人取坐位或卧位,垫便盆,按导尿法清洁、消毒外阴部(轻病人自行清洗),再用0.1%新洁尔灭溶液消毒尿道口,嘱病人自行排尿,护士用试管夹夹住无菌试管,弃去前段尿液,留取中段尿约5ml,留尿前后均应将无菌试管口及棉塞在酒精灯焰上消毒,盖紧棉塞,防止污染。必要时可用导尿法留取。操作完毕,协助病人穿裤,整理用物,及时送验。

男病人留中段尿法基本同女病人法,将尿道口周围彻底消毒后留取即可。

4.注意事项

(1)严格无菌操作,以免污染尿液。采集中段尿时,必须在膀胱充盈情况下进行。

(2)尿内勿混入消毒液,以免产生抑菌作用而影响检验结果。

(三)留12小时或24小时尿标本

1.目的 检查一日尿量及尿内容物,如钠、钾、氯、17-羟类固醇、17-酮类固醇、肌肝、肌酸、尿糖、尿蛋白定量及浓缩查结核杆菌等。

2.用物 备清洁带盖的大口容器(容量为3000-5000ml)。

3.操作方法

(1)备好容器,贴上标签,注明采集的起止时间,并向病人说明留尿的目的、方法。以取得合作。

(2)嘱病人于清晨7时排空膀胱,弃去尿液,记录开始留尿时间,病人解第一次尿时即应加防腐剂(表17-6),使之与尿液混合,防止尿变质;至次晨7时排尽最后一次尿,即24小时尿液全部送验。留12小时尿标本,应从19点开始至次晨7点止。

(3)如作尿肌酸、肌酐、17-羟类固醇、17-酮类固醇、钾、钠、尿糖定量检查,可测定24小时尿总量,记录于检验单上,取出100ml尿液送验,其余弃去。也可将24小时的尿标本分段留取,即:7-11时为第1次,11时-17时为第2次,17-21时为第3次,21时至次晨7时为第4次,作为4段尿糖定性检查。如浓缩检查结核杆菌或作尿蛋白定量检查,则将24小时全部尿液送验。

(四)测定肾功能的尿标本采集法

1.24小时尿比重测定法(浓缩稀释试验法)。

(1)目的 测量肾功能 ,其中主要了解肾小管的调节功能。

(2)用物 6个标本瓶和留12小时尿容器。

(3)操作方法 备好容器贴标签,注明采集时间,在病人在正常饮食情况下进行,上午8时排尿弃去,此后每隔2小时的尿液,分别留于清洁瓶内,共留取6次尿标本送验。20时至次日8时,将尿留入一个标本瓶中送验。

参考值:在正常情况下夜尿量应少于日尿量,夜尿量一般在250-500ml ,最多不超过700ml,如超过此数量,比重固定在1.010 左右,表示肾功能不全。日尿量标本中,其中最高的一次比重应在1.018以上,最低的一次应在1.000 ~1.009.

表17-6常用的防腐剂

剂名机理应用举例
40% 甲醛固定尿中有机成分,抑制细菌生长。爱迪氏计数100ml尿中加0.5ml
甲苯保持尿液的化学成分不变,形成一薄膜覆盖尿液表面,防止细菌污染。尿蛋白定量、尿糖定性加入数滴,测定尿中钾、钠、氯、肌、酐,肌酸等须加入10ml.
浓 盐 酸使尿液在酸性环境中,能防止尿中激素被氧化。17-羟类固醇与17-酮类固醇等检查24小时尿中加5-10ml

2.酚红排泄试验

(1)目的 测定肾小管排泄功能。

(2)用物 静脉穿刺用物1套,1ml注射器,针头,0.6%酚红1支,标本瓶4个。

(3)操作方法

①备齐用物,贴好标本瓶标签,注明标本采集时间,并向病人说明采取标本的目的及方法,试验前2小时至试验完毕禁吸烟、饮茶。

②嘱病人晨起禁食,排尿弃去后,饮水300-500ml,促进排尿。

③静脉注射酚红溶液6mg,剂量必须准确,并记录注射时间。

④注射后15分钟、30分钟、60分钟及120分钟各收集全尿1次,待全部标本采集后,一同送验。

如采用肌内注射法,则于注射后70分钟、120分钟留全部尿一次。

参考值:排泄率分别为15分钟25%-50%,30分钟15%-25%,60分钟10%-15%,120分钟5%-10%。2小时排泄总量>55%。

3.内生肌酐清除率试验

(1)目的 测量肾小球滤过率。

(2)用物 静脉穿刺盘1套,抗凝标本瓶2个,尿标本瓶1个。

(3)操作方法

①患者进低蛋白饮食3天,试验当天勿饮茶或咖啡,避免剧烈运动,清晨嘱病人饮水300ml后排空膀胱,此后准确收集5小时的尿液,并抽血3ml送验。

②测定尿及血中肌酐含量,算出每分钟尿量,再按下式计算内生肌酐清除值。

内生肌酐清除值(ml/min)=尿肌酐浓度(mg/日)×尿量 (ml/min)/血肌酐浓度(ml/日)。

参考值:70-125ml/min.

4.尿素澄清试验

(1)目的 了解肾脏排泄功能。

(2)用物 静脉穿刺盘1套,抗凝标本瓶1个,尿标本瓶2个。

(3)操作方法

①试验前一日及试验当日,病人进正常饮食,但不可饮茶或咖啡,也不宜作剧烈运动。

②当日早餐后(或饮水300ml,半小时后),排尽尿液弃去,此后准确收集第1小时和第2小时的全部尿液,切勿丢失。

③在2小时之间抽血2ml送验。

④分别测定血液及2次尿液中的尿素含量,并算出每分钟尿量。

参考值:最大清除值60-90ml/分,标准清除值41-68ml/分,清除率65%-125%。

如两次尿标本计算的清除率相差超过30%,应重留标本测定。

(五)葡萄糖耐量试验

1.目的 测定胰腺功能。正常人服一定量葡萄糖后,血糖随即升高,待一段时间后,血糖恢复到空腹血糖水平。如给一定量葡萄糖负荷后,观察血糖升高、恢复的水平和速度,可间接了解胰岛β细胞的储备功能。

2.用物 抗凝血标本瓶5个,尿标本瓶5个,静脉穿刺盘1套。

3.操作方法

(1)试验前三天,每日碳水化合物进量不少于300g..

(2)试验前一天晚餐后禁食至试验完毕。

(3)试验日清晨抽血2ml检查血糖,并留尿一次。

(4)将100g葡萄糖溶于300ml开水中,请病人服下,服后半小时、1小时、2小时、3小时、各收集尿标本查尿糖,并分别抽血查血糖,应将标本迅速送验。

参考值:空腹血糖3.9 ~6.2mmol/L,30min<9.5mmol/L, 60min/9.0mmol/L , 2小时≤6.7mmol/L,3小时后恢复至正常水平,每次尿糖均为阴性。

三、粪便标本采集法

(一)粪便常规标本

1.目的 检查粪便颜色、性状、有无脓血、寄生虫卵等。

2.用物 蜡纸盒、竹签。

3.操作方法

(1)将化验单副联贴于蜡纸盒上,注明科室、床号、病人姓名等。

(2)交待病人清晨留取标本,用竹签取5g大便(似蚕豆大小),放入蜡纸盒中送验 。重病人由护士协助留取,如为腹泻病人应取脓、血、粘液等异常部分,如为水样便,可盛于大口玻璃瓶中送验。

(二)粪便培养标本

1.目的 取粪便标本作细菌培养。

2.用物 便盆 清洁蜡纸盒或试管,棉签或肠拭子。

3.操作方法 嘱病人排便于便盆内,用消毒棉签采取粪便的异常部分于蜡纸盒内或试管内,也可用肠拭子蘸等渗盐水,由肛门插入直肠4-5cm处,轻轻转动,取出粪便少许,放入无菌培养试管中,盖好送验。用肠拭子直接采取标本进行培养,可提高阳性率。

(三)检查寄生虫及虫卵标本

1.目的 检查寄生虫数、浓缩集卵、孵化血吸虫毛蚴。

2. 用物 带盖的便器,蜡纸盒,竹签。

3.操作方法

(1)检查寄生虫卵的粪便标本:应从粪便几个不同的部分采集5-10g。如查血吸虫卵,则应采集带血及粘液部分送验;查蛲虫卵,应在23点左右,病人感觉肛门周围发痒时,用无菌棉签蘸生理盐水,自肛门周围皱壁处拭取,然后插入试管内,塞好管口送验。

(2)检查阿米巴原虫的粪便标本;收集标本前,应先将便器加温后再排便,便后连同便盆立即送验(因阿米巴原虫排出体外后因温度突然改变失去活力,不易查到)。

(3)查寄生虫体:病人服驱虫药后,应将大便排于清洁便盆中留取全份粪便,检查蛔虫,钩虫、蛲虫的数目。如驱绦虫,应嘱病人勿用手纸去拉已排出肛门外的虫体,以免拉断虫头不能排出。如第一次大便未见虫头,应告诉病人再留第二次大便送验,只有头节排出才表示驱虫成功。

(4)孵化血吸虫毛蚴的标本;留取粪便50g(鸭蛋大小),必要时留取24小时大便,要及时送验。

(四)隐血标本

1.目的 检查粪便内肉眼不能察见的微量血液。

2. 用物 蜡纸盒、竹签或特制标本盒。

3.操作方法 嘱病人在检查前三天内禁食肉类、肝类、血类、叶绿素类饮食及含铁剂药物,避免出现假阳性,于第4天留取5g 粪便,置于蜡纸盒内, 及时送验。

四、痰标本采集法

(一)痰常规标本

1.目的 检查痰液中的细菌、寄生虫卵和癌细胞。

2.用物 蜡纸盒或广口瓶。

3.操作方法 嘱病人晨起用清水漱口清洁口腔,然后用力咳出气管深处的痰液,盛于蜡纸盒或广口瓶内,如查癌细胞,瓶内应放10%甲醛溶液或95%酒精溶液固定后送验。

(二)痰培养标本

1.目的 检查痰液中的致病菌。

2.用物 朵贝氏液,无菌培养皿或瓶。

3.操作方法 清晨痰量多,含菌量亦大,嘱病人先用朵贝氏液,再用清水漱口,以除去口腔中细菌,深吸气后用力咳出1-2口痰于培养皿或瓶中,及时送验。

(三)24小时痰标本

1.目的 检查一日痰量,观察痰的性状、颜色、量、气味及内容物(虫卵计数)或浓缩查结核菌。

2.用物 痰杯或广口无色玻璃瓶(容量500ml)。

3.操作方法

(1)容器上的贴好标签,注明起止时间,并作好交接班。

(2)嘱病人将晨7时至次日7时的痰液全部留在容器中送验,不可将漱口液、唾液等混入。

五、分泌物培养标本采集法

(一)目的 检查致病菌,协助诊断。

(二)用物

无菌拭子试管,酒精灯,火柴,无菌生理盐水,压舌板。

(三)操作方法

1.咽拭子培养 备齐用物,贴好标签,向病人说明目的以取得合作。点燃酒精灯,将拭子取出蘸无菌生理盐水(必要时以压舌板轻压舌部),嘱病人发“啊”音,以轻快的动作,迅速擦拭两侧腭弓及咽、扁桃体的分泌物后,速将试管口在酒精灯火焰上消毒,将拭子插入试管中塞紧,并立即送验。取霉菌培养标本,须在口腔溃疡面上采取分泌物。

2.伤口分泌物标本 用拭子擦拭伤口分泌物后,速将试管口于酒精灯火焰上消毒,插入拭子塞紧送验。

复习思考题

1.集检验标本有何意义?

2.采集标本的原则是什么?

3.采集全血、血清、血培养标本应各备何种盛血容器?为什么?采集中应注意的事项?

4.如何采集尿常规、12小时24小时的尿标本?

5.如何采集痰标本?

6.怎样采集粪便常规标本、隐血标本?

7.留取寄生虫及虫卵标本时应注意什么?

8.常用的血液抗凝剂有哪些?

9.留取尿标本做爱迪氏计数及17-酮类固醇检查时各应选择何种防腐剂?

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