F(ab)2含量测定

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1 试剂

1.1 丙烯酰胺溶液

取丙烯酰胺14g,双丙烯酰胺0.367g,加蒸馏水至50ml。

1.2 缓冲液

Ph7.2,0.2mol /L PB-0.2%SDS:取NaH2PO4·2H2O17.8g,Na2HPQ4·12H2O103g,SDS4g,加蒸馏水至2000ml。

1.3 样品结合液

取10%SDS4ml,0.2mol/L PB0.2ml,甘油10ml,加蒸馏水至20ml。

1.4 电极缓冲液

取上述1.2项缓冲液稀释1倍。

1.5 固定液

取甲醇400ml,冰醋酸70ml,加蒸馏水至1000ml。

1.6 染色液

取考马斯亮蓝2.5g,溶于500ml甲醇中,加冰醋酸70ml,再加蒸馏水至1000ml。

1.7 脱色液

取冰醋酸70ml,甲醇50ml,加蒸馏水至1000ml。

1.8 干燥液

取甘油30ml,甲醇200ml,加蒸馏水至1000ml。

2 操作

2.1 样品处理

取一定蛋白质浓度的样品0.1ml,加样品结合液0.1ml,100℃翥沸1~2分钟,或37℃2小时,冷却。

2.2 凝胶板制备

按下列比例制备所需量凝胶溶液∶0.2mol /L PB∶丙烯酰胺溶液∶水∶1.5%过硫酸铵=2∶1∶0.8∶0.25。最后加1~2滴四甲基乙二胺(TEMED),混匀后立即将胶液加入电泳槽的玻璃板间,要避免产生气泡。

2.3 加样

于每一样品孔内加入已经处理过的样品25μg蛋白。

2.4 电泳

电泳条件为每个样品孔的电流恒定为2~3mA。当溴酚蓝电泳至底部时停止电泳。

2.5 固定

将电泳后的胶板放入固定液中,过夜。

2.6 染色及脱色

于染色液中染色1~2小时,然后置脱色液中进行脱色,直至底色成为无色为止。

2.7 干燥保存

用适宜方法干燥。

3 结果计算

将干燥前或后的胶板用扫描仪于575nm或520nm处对每一样品进行扫描,得出(或计算出)样品中F(ab)2的百分含量。

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